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VEMVW/I1 FTECNICAS HIS TOLOGICAS RAÁSICAS 1, MICROSCOPIA OPTICA: 1.1 Preparación de los tejidos: Fijación: Retrasa las alteraciones del tejido y mantiene su arquitectura normal Se utiliza formol y líquido de Bouin (entrecruzan las proteínas) Deshidratación: se utiliza baños alcohólicos de 50% - 100% Inclusión: Se debe utilizar Parafina (es una sustancia serosa ,el bloque de parafina contiene al tejido) Corte: Se debe utilizar el micrótomo (el grosor del corte debe ser de 5 a 10 nm) El corte debe ser realizado en muestras congeladas con una cuchilla de acero enfriada Montaje y tinción: El montaje debe ser realizado en un porta objetos de vidrio La tinción debe realizarse mediante colorantes hidrosolubles < Cubre objetos: protege al tejido, necesario para ver el corte al dl 1.2 Colorantes más utilizados: Anión (-) e +o o. » % Hematoxilina: tiñe de azul los componentes ácidos de la célula _Catión y «% Eosina: tiñe de rosa los componentes básicos de la célula <% Azul de toloudina: tiñe de azul los componentes celulares, excepto en soltera que tiñe de color morado Ej. matriz del cartílago y gránulos de mastocitos 1.3 Partes de microscopio óptico (microscopio compuesto): Y” Lente condensadora: condensa la luz y la proyecta en la muestra Y Lente del objetivo: permite magnificar la imagen Y Lente del ocular: enfoca la imagen 1.3.3 partes adiciones del microscopio óptico a saber: Y” Platina: estructura móvil que sostiene la muestra Y” Anillo macrométrico: estructura que sube y baja la platina permitiendo un primer ajuste Y Anillo micrométrico: estructura que sube y baja la platina con movimientos muy pequeños Y” Fuente de iluminación: puede regularse su intensidad Y” Tornillos de desplazamiento del carro: desplaza la muestra atrás, adelante, a los lados Y” El microscopio contiene un brazo y una base 2. MICROSCOPIA ELECTRONICA: 2.1 Preparación de los tejidos: «+ Fijadores: glutaraldehido, paraformaldehido, tetróxido de osmio y permanganato de potasio < Inclusión: Resina Epoxi % Corte: ultrafino (25 a 100 nm) «* Tinción: realizada con metales pesados 2.2 Partes importantes del microscopio electrónico: Cátodo: produce electrones Ánodo: atrae electrones Electroimanes: enfocan el haz de electrones en la muestra Placa fluorescentes: al llegar a la placa fluorescente, la energía de los electrones se convierte en un punto de luz enfocando finalmente la imagen La placa fluorescente puede ser sustituida por una película sensible a los electrones 3, MICROSCOPIA CONFOCAL: Y Utiliza un haz de laser como fuente luminosa (este laser pasa a través de un espejo dicroico y se enfoca en la muestra con la ayuda de dos espejos motorizados) La muestra debe ser tratada con colorantes fluorescentes (se emitirá la luz desde dichos colorantes) La microscopia confocal permitirá obtener imágenes de un único plano confocal e e de LL SA