Pruebas bioquímicas en bacterias, Monografías, Ensayos de Microbiología

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Algunas Pruebas Bioquímicas

Para la identificación de

Bacterias

Pruebas que se utilizan en la identificación preliminar y con lectura inmediata: Catalasa Oxidasa Pruebas rápidas, con lectura en menos de 6h Hidrólisis del hipurato β-galactosidasa (ONPG) Aminopeptidasa LAP (leucina aminopeptidasa leucina arilamidasa ) Ureasa Indol

Fundamento: Determina la presencia de la enzima respiratoria citocromo oxidasa y de citocromo C en bacterias con respiración oxidativa mediante la reacción del Citocromo C oxidado con NN-dimetil p-fenilendiamina (NPDF) el cual se transforma en un compuesto púrpura.

PRUEBA OXIDASA

Técnica: Se toma una gota de un cultivo de 24- 48h del aislado en medio líquido y se coloca sobre un papel de filtro, previamente embebido en NDPF, se espera 30 s: Reacción +: mancha violeta Reacción negativa: No color

Pruebas lentas, con lectura de 18 a 48h

• Óxido-Fermentación
• Reducción de nitratos
• Rojo de metilo
• Voges-Proskauer
• Agar hierro de Kligler
• Fermentación de azúcares
• Hidrólisis de la esculina
• Coagulasa
  • Fenilalanina-desaminasa
  • ADNasa
  • Hidrólisis de la gelatina
  • Descarboxilasas
  • Lipasa Lecitinasa
  • Utilización de citrato
  • Utilización de malonato
  • Prueba de CAMP

Reacción negativa Reacción+ Se usa un colorante indicador de pH que cambia amarillo cunado hay producción de ácido Carbohidratos que se usan: Hexosas: glucosa, galactosa, manosa, fructosa, ramnosa Aerogénico significa que produce gas, anaerogénico lo contrario Monosacáridos: Pentosas: xilosa, arabinosa, ribosa. Disacáridos: sacarosa, maltosa, lactosa, trehalosa, celobiosa y melibiosa Oligosacaridos: inulina (polímeros de fructosa) y rafinosa (glucosa, fructosa, galactosa) Glucósido: salicina, amigdalina, esculina Polialcoholes: adonitol, dulcitol, manitol, sorbitol, eritritol,glicerol, arabitol e inositol.

Fundamento: Se basa en la

capacidad que tienen algunas

bacterias de hidrolizar la esculina

en presencia de bilis al 4%

Técnica

Sembrar una colonia de la

bacteria a identificar con el asa

en punta en el medio B.E.

Incubar a 35°C X 24h

Resultado:

BE+: Ennegrecimiento del medio

BE-: No se pone negro

PRUEBA DE LA BILIS ESCULINA

PRUEBA DE CAMP

Técnica En una placa de agar sangre se siembra una estría de una colonia del Streptocco a identificar perpendicular a una estría sembrada de

Staphylococcus aureus, incubar a 35°C

CAMP+: Formación de una flecha negra entre las estrías CMP - : Nada

Principio:

La Beta Lisina estafilocócica sobre los erotrocitos se

intensifica por un factor extracelular producido por

estreptococcus grupo B

llamado factor Camp

Pruebas basadas en la resistencia a ciertas sustancias Optoquina Bacitracina Solubilidad en bilis Crecimiento en caldo hipersalino

Fundamento: Alguna bacterias como los Enterococos tienen la capacidad de crecer en altas concentraciones de NaCl Técnica: Preparar dos tubos con medio de cultivo líquido con concentración de NaCl al 6.5% Sembrar una colonia en un tubo y dejar el otro de control. Incubar a 35°C X 24h Resultado: Positivo: hay crecimieto, el medio se pone turbio y el tubo sin sembrar se mantiene translucido Negativo: Los 2 tubos con el medio translucido

Crecimiento en Cloruro de sodio 6.5%