V IBEROLAB
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GESTIÓN INTERNA DE LAS CEPAS UTILIZADAS COMO MATERIAL MICROBIOLÓGICO DE
REFERENCIA EN UN LABORATORIO DE SERVICIOS ACREDITADO BAJO NORMA ISO/IEC 17025
R. J. Toselli1, M. Der Ohannesian1 y G. Cheminet1
1 Centro de Química Aplicada (CEQUIMAP) – Facultad de Ciencias Químicas. Universidad Nacional de Córdoba. Medina
Allende y Haya de la Torre – Ciudad Universitaria. 5000 Córdoba, Argentina; e-mails: rtoselli@mail.fcq.unc.edu.ar,
martinder@mail.fcq.unc.edu.ar y gcheminet@mail.fcq.unc.edu.ar
RESUMEN. La validación, verificación e inclusión de
controles positivos y negativos en las pruebas de
tipificación en los ensayos microbiológicos requieren la
utilización de cepas estándar de control de calidad que
constituyen un material de referencia. El objetivo de este
trabajo es presentar un modelo de gestión de dicho material
que incluye su categorización en cultivos stock, semi-stock
y de trabajo, los registros asociados y las pruebas de
control de calidad que sobre ellos se efectúan.
1.- Introducción
La validación y verificación de los procedimientos
microbiológicos, como así también la inclusión de
controles positivos y negativos en las pruebas de
tipificación de ensayos microbiológicos de rutina,
requieren la utilización de cepas estándar de control de
calidad que constituyen un material de referencia. Existen
varias colecciones internacionales de cepas utilizables
como por ejemplo: ATCC (USA), NCIC (Inglaterra), JFCC
(Japón), CCTM (Francia), RIA (Rusia), NCIB (Escocia) y
DSM (Alemania).
El procedimiento utilizado por un laboratorio para el
mantenimiento y la conservación de las cepas de
referencia, debe garantizar la sobrevivencia de las mismas
con un mínimo de mutaciones, para lo cual, el crecimiento
de los microorganismos y el número de repiques
efectuados con ellos deben ser mínimos. Así, el proceso de
gestión de las cepas estándar de referencia, que se utilizan
en un contexto de control de la calidad en un laboratorio de
microbiología, debe asegurar que dichas cepas mantengan
sus características típicas y un comportamiento estable.
El objetivo de este trabajo es presentar un modelo de
gestión del material microbiológico de referencia, tal como
se lleva a cabo en el Laboratorio de Microbiología de
CEQUIMAP, Facultad de Ciencias Químicas de la
Universidad Nacional de Córdoba, Argentina. Esta
institución presta servicios a terceros desde hace más de 25
años y está acreditada bajo Norma IRAM 301:2005
(ISO/IEC 17025:2005).
2.- Categorización de los cultivos de las cepas de
referencia
Cultivo stock: Representa el verdadero banco de cultivos.
Se mantiene en un sistema cerrado de conservación,
minimizando su actividad genética y fisiológica para evitar
su potencial mutación. Uno de los métodos empleados en la
conservación del cultivo stock es el ultracongelamiento a -
80 ºC. En estas condiciones la cepa puede conservarse por
largos períodos de tiempo.
En el cultivo stock se definen dos grupos:
-Cultivo “Stock A”: Es el cultivo stock de referencia. Este
sólo se utilizará en casos de extrema necesidad.
-Cultivo “Stock B”: Cultivo que se utiliza para generar un
cultivo intermedio o semi-stock.
Cultivo semi-stock: Es un cultivo que se mantiene durante
un período de tiempo intermedio entre el cultivo stock,
relativamente permanente y el cultivo de trabajo. Entre los
métodos disponibles para preparar el cultivo semi-stock, el
más práctico es el de congelamiento a -20 ºC. Este
método permite la sobrevivencia de la cepa en algunos
casos por años y en la mayoría de las veces por al menos 6
a 12 meses.
En el cultivo semi-stock, al igual que en el stock, se
definen dos grupos:
-Cultivo “Semi-stock A”: Es el cultivo semistock de
referencia que sólo se utilizará en casos de suma necesidad,
garantizando de este modo que la cepa sufra la menor
cantidad de modificaciones genéticas posibles.
-Cultivo “Semi-stock B”: Cultivo que se utiliza para
generar los cultivos de trabajo.
Cultivo de trabajo: Es el cultivo control que se usa para el
trabajo de rutina. El método de conservación empleado
para este cultivo es el de refrigeración entre 1 y 4 ºC. El
cultivo de trabajo se conserva durante un tiempo variable
según el criterio de cada laboratorio.
3.- Reconstitución y multiplicación de las cepas de
referencia
Cuando el laboratorio adquiere una cepa de referencia, el
ingreso de la misma se asienta en un registro específico del
Sistema de Calidad cuyo formato se presenta en la Fig. 1.
